RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称： RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性： 贴壁生长

冻存条件： 使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系： 1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法： 第一次建议按1:2比例传代；在传代后每隔两天更换培养基。

备注： 用无菌离心管收集培养基，以便进行对比实验。如果对比培养效果不好，建议购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好后，用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞稳定。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（最好是40x, 100x和200x各一张），前三天的照片为重要的售后依据。如果未提供照片，默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化，若大部分细胞变圆并脱落，迅速将其取回，轻敲几下培养瓶，然后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻吹细胞使之完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液后加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞长至覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打以使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液后，沉淀细胞并加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，至冻存管无结晶后，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞黏附不牢可能导致细胞脱落，这是正常现象。处理方法为：将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清液进行对比培养，沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止反应。再离心、弃上清，加入1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

如细胞出现问题，可能会重发的情况包括：

1. 细胞在运输过程中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损等。
2. 细胞污染问题，请在收到后48小时内提供实验结果，核实后重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰发货的细胞复苏后24小时多数细胞未存活，需提供照片。
4. 细胞活性问题需在收到后7天内检测，并由台盼蓝染色法予以判定。

注意，因客户操作不当或使用非推荐培养体系，如有问题将不予重发。

感谢您对尊龙凯时人生就博的信任与支持，我们致力于提供高质量的生物医疗产品与服务！