一、细胞培养条件
细胞名称: RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞
生长特性: 贴壁生长
冻存条件: 使用无血清冻存液(货号:C7001)
培养体系: 1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法: 第一次建议按1:2比例传代;在传代后每隔两天更换培养基。
备注: 用无菌离心管收集培养基,以便进行对比实验。如果对比培养效果不好,建议购买我们的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
在细胞状态良好后,用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口,这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后,使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒,随后在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以帮助细胞稳定。使用显微镜观察细胞生长情况,并拍摄不同倍数的照片(最好是40x, 100x和200x各一张),前三天的照片为重要的售后依据。如果未提供照片,默认细胞状态良好。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
如果细胞汇合度未超过80%,将培养液收集至离心管中,保留5ml完全培养基,并放入37℃、5% CO2孵箱培养;若细胞密度超过80%,可进行传代。具体步骤如下:
- 弃去培养上清,使用不含钙镁的PBS清洗细胞1-2次。
- 加入1-2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA),放置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞变化,若大部分细胞变圆并脱落,迅速将其取回,轻敲几下培养瓶,然后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
- 轻吹细胞使之完全脱落后吸出,转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟,弃去上清液后加入1-2ml完全培养基重悬。
- 按1:2比例分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存
- 当细胞长至覆盖培养瓶80%时,弃去T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次。
- 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液,观察细胞回缩变圆后,加入5ml完全培养基终止消化,轻轻吹打以使细胞脱落,将悬液转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清液后,沉淀细胞并加入1ml雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转移至冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中,如需转入液氮罐,需在-80℃冰箱中存放超过24小时。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管,迅速放入37℃水浴中解冻,至冻存管无结晶后,用75%酒精擦拭管外壁。
- 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清,加入5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
- 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
在运输过程中,细胞黏附不牢可能导致细胞脱落,这是正常现象。处理方法为:将培养瓶中的培养液收集至离心管,1000RPM离心5分钟,收集上清液进行对比培养,沉淀后加入1-2ml胰酶,轻轻吹打后消化1-2分钟,加入5ml完全培养基终止反应。再离心、弃上清,加入1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
五、售后条款
如细胞出现问题,可能会重发的情况包括:
- 细胞在运输过程中出现问题,如细胞丢失、瓶身破损等。
- 细胞污染问题,请在收到后48小时内提供实验结果,核实后重发。
- 常温发货的细胞静置24小时后,干冰发货的细胞复苏后24小时多数细胞未存活,需提供照片。
- 细胞活性问题需在收到后7天内检测,并由台盼蓝染色法予以判定。
注意,因客户操作不当或使用非推荐培养体系,如有问题将不予重发。
感谢您对尊龙凯时人生就博的信任与支持,我们致力于提供高质量的生物医疗产品与服务!