胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）是来源于健康母牛怀孕4至8月龄胎牛的血液，经过无菌采集和多重筛选流程而制成，常用于多种真核细胞的培养中，为细胞提供必要的营养成分和生长因子。因此，它已成为各大实验室的“常客”。为了充分发挥胎牛血清的作用，确保细胞的健康状态，以下是一些实用的小建议，供实验人员参考。

一、如何解冻首次使用的胎牛血清？

胎牛血清通常在-20℃保存，若需长期存储，建议置于-80℃。解冻时，避免将其直接放置于常温（25-37℃），因为这样容易形成絮状沉淀，进而影响血清的品质。推荐的解冻方法是：首先将其从-20℃或-80℃转移至4℃，待完全化冻后，再转至室温。在解冻过程中，需定时轻轻摇晃瓶子，以帮助血清成分充分混合，减少沉淀出现。解冻后，可以将血清分装于无菌离心管中保存，若频繁使用，可以在4℃存放一管已解冻的血清，并尽量在一个月内用完。

二、血清的添加量应如何控制？

在细胞培养中，血清的添加量一般不宜过多，常见浓度为5%、10%或20%。大多数细胞在正常培养中使用10%的血清，而某些原代细胞在提取时可使用20%血清。具体的适用血清浓度应根据细胞的特性和实验目的进行调整。

三、热灭活的必要性

热灭活指的是在56℃下处理血清30分钟，以去活化补体。补体参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩等。通常而言，热灭活并非大多数细胞培养的必需步骤，经过此处理的血清对细胞生长的促进作用有限，甚至可能因高温降低血清质量，导致细胞生长速率减缓以及沉淀物增加。

四、更换血清的正确步骤

在细胞培养中，常常需要更换血清。直接将另一种血清的培养基替换过去，可能会导致细胞增殖速度突变或出现脱壁现象。这是因为细胞已经适应了原有的培养环境，更换营养环境（即使是更优质的血清）也可能引起不适应。通常建议采用逐步替换的方法：首次更换时将新旧血清按1:3的比例混合，接下来依次为1:1、3:1，最后完全替换。对于对培养环境敏感的细胞，替换比例应更精细调整。

五、关于解冻后出现的悬浮物

如果在解冻后发现少量乳白色絮状物或点状物，这通常是血清中的脂蛋白或纤维蛋白变性所引起的。这些絮状物不影响血清的质量，可以通过400×g离心5分钟后取上清使用，对细胞的影响也相对有限。

六、血清是否需要过滤处理？

一般情况下，生产厂家提供的血清都是无菌的，无需进一步过滤。如果发现血清中有悬浮物，可以将其与培养基一起过滤，但切记不要直接过滤血清。

七、观察到的黑点是否为污染？

如果在细胞培养过程中发现有黑点，首先应检查培养基是否混浊，黑点是否在无规则移动。污染细胞通常伴随着培养基迅速变黄和混浊，可能是细菌或支原体引起的。如果观察到的细胞生长状态良好，与黑点出现前无显著变化，黑点可能是已破碎细胞的残骸、血清中的杂蛋白或是培养基的水质问题。可以通过离心或过滤的方式去除这些黑点，部分原代细胞中的杂质在多次传代后可逐渐清除。

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